人RAD23同源物B(RAD23B) ELISA 試劑盒
快速詢價(jià)：021-51172858
1. 預(yù)期用途
本試劑盒設(shè)計(jì)用于定量檢測血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清、細(xì)胞裂解物等樣本中的RAD23B濃度，僅供研究使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
2. 檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法原理：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及校準(zhǔn)品中待測物，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的酶標(biāo)二抗，結(jié)合形成“抗體-抗原-抗體-HRP”免疫復(fù)合物，加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍(lán)色，加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中待測物的濃度。
3. 包含的實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料
名 稱 Label | 組成成分 Kit Components | 數(shù)量（48T） Quantity | 數(shù)量（96T） Quantity |
酶標(biāo)板 | 預(yù)包被捕獲半抗原的酶標(biāo)板 | 8×6條 | 8×12條 |
校準(zhǔn)品（10×） | 待測靶抗原（100ng/mL） | 1支×100μL | 1支×200μL |
酶標(biāo)抗體（100×） | HRP酶標(biāo)記的檢測抗體 | 1支×50μL | 1支×100μL |
通用稀釋液 | 樣品/校準(zhǔn)品/酶標(biāo)抗體通用稀釋液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
濃縮洗液（20×） | 20倍濃縮洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
顯色劑 | TMB、過氧化氫 | 1支×6mL | 1支×10mL |
終止液 | 稀硫酸、抗沉淀劑 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需單獨(dú)采購通用型組分，請?zhí)峁?yīng)的組分名稱。
4. 需要但未包含的實(shí)驗(yàn)材料
· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；
· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；
· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機(jī)、旋渦振蕩器等輔助設(shè)備；
恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。
5. 試劑的準(zhǔn)備及儲存
· 試劑盒各組分應(yīng)儲存于2~8℃保存；
· 使用前請確保試劑盒按規(guī)定的條件儲存，每次實(shí)驗(yàn)僅準(zhǔn)備所需實(shí)驗(yàn)用量的試劑，試劑盒最多可以使用3次；
· 校準(zhǔn)品開封前應(yīng)離心30秒，確保所有校準(zhǔn)品集中于底部；
· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。配制好的洗液可以在2~8℃保存1周；
· 校準(zhǔn)品的配制：準(zhǔn)備7個試管，先將10×校準(zhǔn)品按需吸取一定量用“通用稀釋液”稀釋10倍配制成檢測線性范圍上限校準(zhǔn)品S1。（例：50uL的校準(zhǔn)品（10×）+450uL的“通用稀釋液”，制備得到500μL的S1濃度校準(zhǔn)品）。隨后在6個離心管中分別加入250μL的“通用稀釋液”，在這6個試管中（S2~S7）將S1校準(zhǔn)品依次倍比稀釋6個梯度至S7，共配制7個濃度的校準(zhǔn)品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下圖所示，“通用稀釋液”作為零濃度校準(zhǔn)品S0。
1×酶標(biāo)抗體工作液的配制：（100×）酶標(biāo)抗體工作液用“通用稀釋液”按1:100倍稀釋，例如：10uL的（100×）酶標(biāo)抗體加入990uL的“通用稀釋液”，混合均勻。配制好的1×酶標(biāo)抗體工作液可以在2~8℃保存8h。
6. 樣品采集、預(yù)處理及儲存
下面列出的樣品收集和儲存條件旨在作為一般性指導(dǎo)，不同類型樣品的儲存、使用穩(wěn)定性尚未完全評估。
· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細(xì)胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應(yīng)及時進(jìn)行檢測，如不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，冷凍儲存血清樣品凍融不超過2次。
· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應(yīng)及時進(jìn)行檢測，如不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，冷凍儲存血漿樣品凍融不超過2次。
· 組織：用預(yù)冷的PBS（0.01M，pH=7.4）沖洗組織，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織加入裂解液，一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的裂解液，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，裂解液應(yīng)加入蛋白酶抑制劑，于冰上對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
· 細(xì)胞：取適量細(xì)胞，于冰上進(jìn)行超聲破碎，5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
· 細(xì)胞上清：取細(xì)胞上清于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。
7. 實(shí)驗(yàn)步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。
1 | 校準(zhǔn)品孔每孔加入100μL校準(zhǔn)品S0-S7 |
2 | 待測樣品孔每孔加入通用稀釋液50uL，再加入樣品50uL。（樣品稀釋2倍*） |
3 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。 |
4 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
5 | 每孔加入100μL預(yù)先配制好的1×酶標(biāo)抗體工作液。 |
6 | 蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。 |
7 | 洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。 |
8 | 每孔加入100μL顯色液 |
9 | 37℃下避光孵育15分鐘。 |
10 | 每孔加入50μL終止液。 |
11 | 使用酶標(biāo)儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進(jìn)行檢測。如果最高濃度校準(zhǔn)品OD值過高，應(yīng)立即在405/630nm雙波長條件下檢測。 |
*如樣本珍貴量少，可適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)。
8. 結(jié)果計(jì)算
使用專業(yè)化軟件進(jìn)行結(jié)果擬合和計(jì)算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。以濃度值為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合。
注意事項(xiàng)： 樣本濃度應(yīng)當(dāng)乘上稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
9. 檢測的局限性
樣本濃度超出檢測范圍上限時，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)后再次檢測，計(jì)算結(jié)果應(yīng)當(dāng)乘上稀釋倍數(shù)。樣本濃度低于LOQ定量限時，檢測結(jié)果無法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
10. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
以下結(jié)果基于校準(zhǔn)品的濃度值實(shí)驗(yàn)得出，未納入基質(zhì)效應(yīng)等其他因素的潛在影響。
靈敏度：0.054 ng/mL
線性范圍：0.16-10 ng/mL
精密度：板內(nèi)精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關(guān)因子在稀釋緩沖液中制備為10μg/mL測定，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。?
11. 注意事項(xiàng)
· 試劑盒內(nèi)所有成分僅供研究使用！
· 終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，應(yīng)謹(jǐn)慎操作。
· 試劑盒成分含防腐劑、蛋白成分等，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
· 顯色劑、濃縮洗液可能引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
· 佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服、眼睛和面部防護(hù)用品，實(shí)驗(yàn)操作后徹底洗手。
12. 技術(shù)要點(diǎn)
· 不同批次的試劑盒不能混用，不建議將不同板上的微孔板條組裝在一塊板上檢測，盡管是同一批次試劑，也可能存在板與板之間的差異。
· 每次實(shí)驗(yàn)時應(yīng)當(dāng)始終配制標(biāo)準(zhǔn)曲線平行檢測，不能將上一次的標(biāo)準(zhǔn)曲線用于下一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算。
· 不要使用超過有效期的試劑盒進(jìn)行檢測。
· 底物顯色劑應(yīng)當(dāng)為無色，如變藍(lán)表明已變質(zhì)，不能應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)。
· 使用適當(dāng)?shù)姆獍迥っ芊馕⒖装鍡l，以便檢測結(jié)果更加可靠。
· 操作時盡量避免產(chǎn)生氣泡。不要將不同試劑瓶的瓶蓋交叉使用。
· 應(yīng)當(dāng)遵循說明書的操作進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不按照說明書的操作將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的變化，任何不遵循說明書的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)當(dāng)事先詢問售后技術(shù)支持的建議。否則我們不保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠。
